レポーター
遺伝子(Reporter gene)は、特定の
遺伝子が細胞や
生物内で「いつ」「どこで」「どのくらいの強さで」働いているかを、研究者が容易に確認するために用いられる特別な
遺伝子です。
目的と用途
この技術は、主に
組換えDNAを用いて新たな
遺伝子を導入したり、既存の
遺伝子を改変したりした際に、その操作が成功したか、あるいは導入された
遺伝子が期待通りに機能しているかをモニターするために開発されました。具体的には、以下のような場面で利用されます。
組換え遺伝子の発現確認: 作製した組換え
遺伝子が、想定した細胞の種類や発生段階で発現しているか、発現量はどの程度かを確認します。
プロモーター活性の評価:
遺伝子の発現を制御するスイッチである
プロモーター領域が、どのような条件(特定の刺激、薬剤、発生段階など)で活性化されるか、その活性の強さを測定します。
タンパク質の挙動観察: レポーター
遺伝子の産物と目的のタンパク質を結合させ、その複合体の細胞内での局在や移動を追跡します。
プロモーター配列の探索: ランダムなDNA断片をレポーター
遺伝子の上流に連結させ、
プロモーターとして機能する配列を探し出します。
作用メカニズム
レポーター
遺伝子は、自身の
遺伝子産物(タンパク質や
酵素)が、通常では検出が困難な
遺伝子の発現状況を「報告」できるような特殊な性質を持つように設計されています。
最も一般的なのは、以下のいずれかの性質を持つ産物を作るレポーター
遺伝子です。
1.
光を発する性質: 特定の励起
光を当てると蛍
光を発する蛍
光タンパク質(例:GFP、DsRed)や、特定の基質と反応して発
光する
酵素(例:
ルシフェラーゼ)。
2.
色を発する性質: 特定の基質と反応して発
色する
酵素(例:β-グルクロニダーゼ、lacZ、CAT)。
これらのレポーター
遺伝子は、通常、調べたい目的
遺伝子の発現を制御する領域(
プロモーターなど)の下流に連結されて細胞に導入されます。この融合
遺伝子から作られるレポーター産物の
光や
色を測定・観察することで、
プロモーターの活性や目的
遺伝子の発現状況を間接的に把握できるのです。
プロモーターが活性化されて目的
遺伝子が発現するのと同じタイミングで、レポーター
遺伝子も発現し、検出可能なシグナル(
光や
色)を生み出します。
求められる性質
優れたレポーター
遺伝子として機能するためには、いくつかの重要な条件を満たす必要があります。
検出の容易さ: 産物の活性や存在量が、簡便かつ高感度で測定できること。
非毒性: 細胞や
生物の生理機能に悪影響を与えないこと。
特異性: 生体内にもともと存在する物質と混同されず、レポーター産物のみを特異的に検出できること。
検出の多様性: 細胞レベルだけでなく、組織や個体全体レベルでの観察や定量が可能なもの。
特にGFPのような蛍
光タンパク質は、生きたままの細胞や
生物を染
色することなく観察できるため、細胞の状態変化やタンパク質の動態追跡に非常に有用です。
主なレポーター遺伝子の例
研究分野や目的に応じて様々なレポーター
遺伝子が利用されています。代表的なものには以下のような種類があります。
緑
色蛍
光タンパク質(GFP)とその誘導体(DsRed、カエデなど)
ルシフェラーゼ
β-グルクロニダーゼ(GUS)
lacZ
* クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)
まとめ
レポーター
遺伝子は、
遺伝子発現研究、分子
生物学、細胞
生物学、発生
生物学など、幅広い分野で不可欠なツールとなっています。その活用により、
遺伝子の働きや調節機構に関する深い理解が可能となり、生命現象の解明やバイオテクノロジーの発展に大きく貢献しています。