ローリー法

ローリー法（Lowry method）

ローリー法は、生体試料などに含まれるタンパク質の量を正確に測定するために広く利用されている化学分析手法の一つです。特に0.01から1.0 mg/mlという比較的低濃度のタンパク質溶液の測定に適しています。

測定原理

この方法は、タンパク質のペプチド結合が銅イオンと反応して紫色に呈色するビウレット反応と、特定の芳香族アミノ酸（トリプトファン、チロシン）やシステインの側鎖が酸化される反応を組み合わせたものです。

測定は、まずアルカリ性の条件下でタンパク質試料に硫酸銅を加え、続いてフォリン-チオカルトー試薬と呼ばれる特殊な試薬を添加して化学反応を起こさせます。フォリン-チオカルトー試薬は、タングステン酸やモリブデン酸、リン酸などを含む混合物であり、フェノール類の検出にも使われることから「フェノール試薬」とも称されます。

フォリン-チオカルトー試薬は、タンパク質を構成するアミノ酸のうち、トリプトファン、チロシンといった芳香族アミノ酸や、システインといった硫黄を含むアミノ酸の側鎖と反応します。この反応により、試薬中のホスホタングステン酸やホスホモリブデン酸が還元され、これが750nm付近の光を強く吸収する物質に変化するのです。この反応液は肉眼では青藍色に見えることが多いです。

この750nm付近の吸収は、ビウレット反応によって生じる物質の吸収波長とも近接していますが、フォリン-チオカルトー試薬を用いた反応が加わることで、ビウレット法単独で測定するよりも約100倍も高い感度での検出が可能となります。

特徴と利用

比較的簡単な操作で測定できるため、紫外吸収法やブラッドフォード法といった他の一般的なタンパク質定量法と並んで、研究や臨床検査などで広く用いられています。

欠点と改良

しかしながら、いくつかの欠点も存在します。

反応が完了するまでに比較的長い時間を要すること。
タンパク質のアミノ酸組成によって発色の度合い（すなわち感度）が異なるため、検量線を作成する際に用いる標準タンパク質と測定対象のタンパク質が異なる場合に誤差が生じる可能性があること。
* 遊離アミノ酸、フェノール化合物、還元剤、EDTAなどの特定の物質が共存すると測定が妨害される可能性があること。

これらの欠点を改善するために開発された方法として、ビシンコニン酸法（BCA法）などが存在し、状況に応じて使い分けられています。

歴史的意義

ローリー法を初めて詳細に報告した論文は、学術界において極めて大きな影響力を持ち続けており、「世界で最も引用された論文」の一つとして広く認識されています。これまでに30万回を超える引用数を記録しており、その科学的貢献度の高さを物語っています。

学術論文の引用回数ランキングにおいて、ローリー法の論文に次いで引用が多い論文の中には、タンパク質の研究に関連するものが複数含まれています。具体的には、ウルリッヒ・レムリーによるタンパク質の分離に関する論文が2位に、そしてローリー法と同じくタンパク質定量法であるブラッドフォード法の論文が3位に挙げられることがあります。

関連する技術としては、タンパク質の構造や機能、あるいは窒素含有量からタンパク質量を推定するケルダール法などがあります。

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